Il -kwantifikazzjoni ta 'proteina kolorimetrika spettrofotometrika
Il-proteini huma ġeneralment taħlita ta 'proteini. L-analiżi kolorimetriċi huma bbażati fuq il-kostitwenti tal-proteini: Amino acids (eż. Tyrosine, serine) jirreaġixxu ma 'grupp jew żebgħa kromogenic addizzjonali biex jipproduċu materjal ikkulurit. Il-konċentrazzjoni tal-materjal ikkulurit hija direttament relatata man-numru ta 'amino acids li tirreaġixxi l-proteina, u b'hekk tirrifletti l-konċentrazzjoni tal-proteina.
Metodu kolonimetriku
Hemm bosta metodi bħal BCA, Bradford, u Lowry.
Il-metodu Lowry: Ibbażat fuq ir-reazzjoni Buret bikrija u mtejba. Il-proteina tirreaġixxi ma 'Cu2 biex tipproduċi reazzjoni blu. Madankollu, il-metodu Lowry huwa aktar sensittiv minn Biuret. L-iżvantaġġ huwa l-ħtieġa li jiżdiedu b'mod sekwenzjali diversi reaġenti differenti; ir-reazzjoni tieħu żmien twil; huwa suxxettibbli għal sustanzi li mhumiex proteini; proteini li fihom EDTA, Triton x-100, u sulfat ta 'l-ammonja mhumiex adattati għal dan il-metodu.
Analiżi tal-aċidu Bicinchoniinine: Din hija analiżi tal-proteina aktar ġdida u sensittiva. Il-proteina li għandha tiġi analizzata tirreaġixxi ma 'Cu2 f'soluzzjoni alkalina biex tipproduċi Cu, li tifforma kelat ma' BCA biex jiffurmaw kompost vjola b'qawwa ta 'assorbiment ta' 562 nm. Ir-relazzjoni lineari bejn il-konċentrazzjoni ta 'dan il-kompost u l-proteina hija qawwija, u l-kompost iffurmat wara r-reazzjoni hija stabbli ħafna. Fir-rigward tal-metodu Lowry, l-operazzjoni hija sempliċi u s-sensittività hija għolja. Madankollu, simili għall-metodu ta 'Lowry, huwa suxxettibbli għall-interferenza mal-proteini u d-deterġenti.
Il-metodu ta 'Bradford: Il-prinċipju ta' dan il-metodu huwa li l-proteina tirreaġixxi ma 'Coomassie Brilliant Blue biex tipproduċi kompost ikkulurit li jassorbi f'595 nm. L-akbar karatteristika tiegħu hija s-sensittività tagħha, li hija 2 darbiet dik ta 'Lowry u BCA. Huwa aktar sempliċi u aktar mgħaġġel. Hija teħtieġ biss tip wieħed ta 'reaġent ta' reazzjoni. Il-kompost jista 'jkun stabbli għal siegħa biex tiffaċilita r-riżultat; Waqt li jinterferixxi ma 'Lowry, BCA jirreaġixxi ma' aġenti ta 'tnaqqis (eż. DTT, mercaptoetanol) kompatibbli. Madankollu, għadu sensittiv għad-deterġenti. L-iżvantaġġ prinċipali huwa li standards differenti jistgħu jwasslu għal differenzi kbar fir-riżultati tal-istess kampjun u mingħajr riżultati komparabbli.
Xi riċerkaturi li huma esposti għal kejl kolorimetriku għall-ewwel darba jistgħu jiġu konfużi mir-riżultati tat-testijiet kolorimetriċi varji. X'tip ta 'metodi taħseb li se tkun konfuż? Minħabba l-fatt li l-gruppi rreaġixxew b'modi differenti u l-gruppi kromogeniċi mhumiex l-istess, diversi metodi huma wżati simultanjament biex jagħmlu l-kampjun konċentrazzjonijiet tal-istess kampjun inkonsistenti. Pereżempju, Keller et al. ittestja l-proteina fil-ħalib tal-bniedem u sabet li l-konċentrazzjonijiet imkejla minn Lowry u BCA kienu ogħla b'mod sinifikanti minn dak ta 'Bradford. Id-differenza kienet sinifikanti. Anki jekk l-istess kampjun jiġi stabbilit, il-kampjun standard magħżul bl-istess metodu kolorimetriku huwa inkonsistenti, u l-konċentrazzjoni wara t-test hija wkoll inkonsistenti. Per eżempju, uża Lowry biex tittestja l-proteina fiċ-ċellola omoġenata, billi tuża BSA bħala standard, b'konċentrazzjoni ta '1.34 mg / ml, u globulina bħala standard b'konċentrazzjoni ta' 2.64 mg / ml. Għalhekk, qabel ma tagħżel metodu kulurimetriku, huwa preferibbli li tirreferi għall-kompożizzjoni kimika tal-kampjun li għandu jiġi ttestjat, u sib proteina standard kimikament simili bħala standard. Barra minn hekk, il-metodu kolorimetriku għall-kwantifikazzjoni tal-proteini ħafna drabi jikkawża problemi minħabba li l-valur tal-assorbiment tal-kampjun huwa baxx wisq, u jirriżulta f'differenza kbira bejn il-konċentrazzjoni mkejla tal-kampjun u l-konċentrazzjoni attwali. Il-kwistjoni prinċipali hija li l-kulur tal-parti importanti tal-1011 spettrofotometru, il-cuvette, għandu ċertu half-life, għalhekk kull metodu kolorimetriku jelenka l-ħin tat-test tar-reazzjoni. Il-kampjuni kollha (inklużi kampjuni standard) għandhom ikunu ttestjati f'dan iż-żmien. Jekk il-ħin huwa twil wisq, il-valur tal-assorbiment miksub isir iżgħar u l-valur tal-konċentrazzjoni konvertita jonqos. Barra minn hekk, it-temperatura tar-reazzjoni, il-valur tal-pH tas-soluzzjoni, eċċ huma kollha fatturi importanti li jaffettwaw l-esperiment. Barra minn hekk, huwa importanti ħafna li tintuża kolorimetrija tal-plastik. Evita li tuża cuvettes magħmula minn kwarz jew ħġieġ għax il-kulur wara r-reazzjoni se jikkawża kwarz jew ħġieġ li għandu jkun ikkulurit, li jirriżulta f'assorbenza mhux eżatta tal-kampjun.
Il-kumpanija tispeċjalizza fil-bejgħ ta ' spettrofotometri , klijenti milqugħa li għandhom bżonn li jikkonsultaw u jixtru, aħna ser nipprovdulek servizz sinċier u prodotti ta' kwalità, kif ukoll prezzijiet aktar baxxi.
E-mail: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com