Kwantifikazzjoni ta 'Aċidi Nukleiċi fi Spettrofotometri
Il-kwantifikazzjoni ta 'aċidi nukleiċi hija l-funzjoni l-aktar użata ta' spettrofotometru. L-oligonucleotides, DNA ta 'ċelluli doppji, u l-RNA jistgħu jiġu kkwantifikati f'buffers. Il-quċċata ta 'l-assorbiment ta' l-ogħla quċċata ta 'assorbiment ta' aċidu nuklejku hija ta '260 nm. Kull aċidu nukleiku għandu kompożizzjoni molekulari differenti u għalhekk għandu fatturi ta 'konverżjoni differenti. Biex tikkwantifika tipi differenti ta 'aċidi nukleiċi, agħżel il-koeffiċjenti korrispondenti minn qabel. Per eżempju, l-assorbiment ta '1OD huwa ekwivalenti għal 50 μg / ml dsDNA, 37 μg / ml ssDNA, 40 μg / ml RNA, u 30 μg / ml Olig, rispettivament. Il-valur ta 'assorbiment wara t-test jiġi konvertit bil-koeffiċjent ta' hawn fuq biex tinkiseb il-konċentrazzjoni tal-kampjun korrispondenti. Qabel l-ittestjar, agħżel il-proċedura korretta, daħħal il-volumi tas-soluzzjoni tal-ħażna u d-dilwent, u ttestja s-soluzzjonijiet vojta u tal-kampjun. Madankollu, l-esperiment ma kienx faċli. Qari mhux stabbli jista 'jkun l-akbar uġigħ ta' ras għall-esperimentaturi. Aktar ma tkun għolja s-sensittività ta 'l-istrument, iktar ikun kbir it-tifrix tal-assorbiment esibit.
Fil-fatt, il-prinċipju tad-disinn u l-prinċipju tax-xogħol tal- ispettrofotometru jippermettu li l-valur tal-assorbiment jinbidel f'ċertu firxa, jiġifieri l-istrument għandu ċertu livell ta 'preċiżjoni u preċiżjoni. Bħal eżattezza Biophotometer Eppendorf ≤ 1.0% (1A). Ir-riżultati ta 'dawn it-testijiet multipli ivarjaw bejn il-medja ta' 1.0% u huma kollha normali. Barra minn hekk, għandhom jitqiesu wkoll il-proprjetajiet fiżikokimiċi ta 'l-aċidu nuklejku, il-pH tal-buffer għad-dissoluzzjoni ta' l-aċidu nuklejku, il-konċentrazzjoni tal-jone eċċ. Matul it-test, drift bħala TE, li se jistabbilizza bil-kbir il-qari. Il-konċentrazzjoni dilwita tal-kampjun hija wkoll fattur mhux negliġibbli: minħabba l-preżenza inevitabbli ta 'partikuli żgħar fil-kampjun, speċjalment kampjuni ta' aċidu nuklejku. Il-preżenza ta 'dawn il-partikoli żgħar tinterferixxi mal-effett tat-test. Sabiex titnaqqas l-influwenza tal-partiċelli fuq ir-riżultati tat-test, l-assorbenza tal-aċidu nuklejku hija meħtieġa li tkun mill-inqas 0.1 A, u l-assorbiment huwa preferibbilment 0.1-1.5 A. F'din il-medda, m'għandu jkun hemm ebda bżieżaq fil- taħlita, u m'hemm l-ebda sospensjoni fil-vojt. Inkella, il-qari jaqa 'b'mod vjolenti; l-istess tazza kolorimetrika għandha tintuża biex tittestja l-vojt u l-kampjun; inkella, id-differenza tal-konċentrazzjoni hija kbira wisq; il-koeffiċjent tal-konverżjoni u l-unità tal-konċentrazzjoni tal-kampjun huma l-istess; Il-cuvette li tintlibes mit-tieqa; il-volum tal-kampjun għandu jilħaq aktar mill-volum minimu meħtieġ tat-tazza tal-kulur, eċċ.
Minbarra l-konċentrazzjoni ta 'aċidu nukleiku, l- ispettrofotometru juri bosta proporzjonijiet importanti ħafna fl-istess ħin biex jindikaw il-purità tal-kampjun, bħalma huwa l-proporzjon A260 / A280, biex tiġi evalwata l-purità tal-kampjun, peress li l- hija 280 nm. Il-kampjuni puri għandhom proporzjon akbar minn 1.8 (DNA) jew 2.0 (RNA). Jekk il-proporzjon huwa inqas minn 1.8 jew 2.0, jindika l-preżenza ta 'sustanzi proteini jew fenoliċi. A230 tindika li hemm xi kontaminanti fil-kampjun, bħal karboidrati, peptidi, fenoli, eċċ. Il-proporzjon ta 'aċidu nuklejku pur A260 / A230 huwa akbar minn 2.0. A320 jiskopri t-turbidità tas-soluzzjoni u fatturi oħra ta 'interferenza. Il-kampjun pur, A320 huwa ġeneralment 0.
Il-kumpanija tispeċjalizza fil-bejgħ ta ' spettrofotometri , klijenti milqugħa li għandhom bżonn li jikkonsultaw u jixtru, aħna ser nipprovdulek servizz sinċier u prodotti ta' kwalità, kif ukoll prezzijiet aktar baxxi.
E-mail: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com