Introduzzjoni Għall-Prinċipju U Applikazzjoni ta 'Komponenti Ġenerali ta' Spettrofotometru

L-ispettrofotometru huwa użat ħafna fir-riċerka bijoloġika, kimika, klinika u ambjentali.
L-ispettrofotometrija tkejjel kemm dawl kimiku jista 'jassorbi billi tgħaddi raġġ ta' dawl permezz ta 'kampjun fi spettrofotometru.
Billi tkejjel l-intensità tad-dawl misjuba, jista 'jintuża l-metodu biex tiġi ddeterminata l-konċentrazzjoni tas-solut fil-kampjun.
Il-kunċett ta 'Spettrofotometrija
Ir-raġġ mibgħut lill-kampjun jikkonsisti minn raġġ tal-fotoni.
Meta l-fotoni jiltaqgħu mal-molekuli fil-kampjun, il-molekuli jistgħu jassorbu wħud minnhom, inaqqsu n-numru ta 'fotoni fir-raġġ u jnaqqsu l-intensità tas-sinjal ta' sejbien.
It-trażmissjoni hija parti mid-dawl li jgħaddi mill-kampjun. Huwa definit bħala l-intensità tad-dawl li tgħaddi mill-kampjun fl-intensità tad-dawl inċidentali.
L-assorbenza hija opposta għat-trasmittanza, li tikkorrispondi għall-ammont imkejjel bl-ispettrofotometru.
Skond l-assorbenza, il-konċentrazzjoni tal-kampjun tas-soluzzjoni tista 'tiġi ddeterminata mill-abbozz tal-liġi ta' Lambert, li juri li hemm relazzjoni lineari bejn l-assorbenza u l-konċentrazzjoni tal-kampjun. Skond il-liġi Lambert tal-birra, l-assorbenza hija l-prodott ta 'koeffiċjent ta' assorbiment, li huwa kejl ta 'l-ammont ta' dawl assorbit mis-solut f'tul ta 'mewġa partikolari u d-distanza li minnha tgħaddi d-dawl. Kampjun, jew distanza ta 'l-ivvjaġġar, u konċentrazzjoni ta' solute. B'mod ġenerali, l-għan tal-kejl tal-assorbenza huwa li titkejjel il-konċentrazzjoni tal-kampjun.
Komponenti ta 'l-ispettrofotometru
Kull spettrofotometru jikkonsisti minn sors tad-dawl, kollimatur (lenti jew apparat li jiffoka għat-trasmissjoni ta 'travi qawwija u dritti), monokromatur biex jissepara travi ta' tulijiet ta 'mewġa differenti, u selettur tat-tul għall-għażla tal-mewġ jew tal-kanal tat-tul ta' mewġ mixtieq. It-tul ta 'mewġa tad-dawl użat fl-ispettrofotometru ppreżentat f'dan il-video huwa fil-medda tad-dawl ultravjola u viżibbli. L-ispettrofotometru jinkludi wkoll detentur tal-kampjun, fotodetector u skrin li juri r-riżultati tad-ditekter.
L-iktar spettrofotometru reċenti huwa akkoppjat direttament ma 'kompjuter, fejn il-parametri sperimentali jistgħu jiġu kkontrollati u jintwerew ir-riżultati.
Prinċipju ta 'ħidma ta' l-ispettrofotometru
Meta tkun qed twettaq spettrofotometrija, huwa importanti li jittieħdu l-prekawzjonijiet xierqa, bħall-ilbies ta 'ingwanti, skont it-tip ta' soluzzjoni bijoloġika jew kimika li tuża.
Ixgħel l-istrument u ħalli l-lampa u l-elettronika jsaħħnu qabel tkejjel l-ispettru UV-Vis tal-kampjun.
Ipprepara kampjun vojt ta 'l-istess soluzzjoni bl-istess pH u qawwa ijonika simili, iżda mingħajr il-komponenti li jridu jiġu analizzati; billi l-kuvetta u s-solvent jistgħu jxerrdu d-dawl, huwa meħtieġ li jiġi analizzat il-kampjun.
Id-detentur tradizzjonali tal-kampjun tal-ispettrofotometru huwa ddisinjat biex iżomm il-bwieqi tal-plastik u tal-kwarz. Ippipetta s-soluzzjoni oriġinali ġo skutella.
Wara li timsaħ kwalunkwe marki tas-swaba 'u titjirhom fuq barra tal-iskutella, daħħal il-kuvetta b'mod korrett fid-detentur tal-kampjun u agħlaq il-bieb tal-għatu.
Qatt tinsa li tagħlaq il-bieb għax ir-radjazzjoni UV minn spettrofotometru miftuħ tista 'tagħmel ħsara lill-għajnejn u l-ġilda tiegħek.
Ipprogramma t-tul ta 'mewġa jew il-medda tat-tul ta' mewġa mixtieqa li se jiġu trażmessi lill-kampjun. Dan jiddependi fuq l-aħjar tul ta 'mewġa li l-komponent li qed jiġi analizzat jista' jassorbi. Imbagħad il-magna titnaqqas mill-kejl tal-kampjun vojt, li jitnaqqas l-assorbenza tal-qiegħ minħabba l-buffer tal-kampjun.
Skont it-tip ta 'esperiment ta' spettrofotometrija li qed tagħmel, jista 'jkun meħtieġ li tiġġenera kurva standard qabel il-kejl tal-kampjun, li minnu tista' tiġi determinata l-konċentrazzjoni tal-kompost analizzata fil-kampjun.
Ħalli l-kampjun jilħaq it-temperatura xierqa u ħawwad bil-mod biex tevita li tiddaħħal bżieżaq. Imbagħad il-kampjun jista 'jiżdied direttament mal-iskutella ġewwa l-magna u tista' ssir qari.
Wara li l-kampjun ikun imkejjel għall-assorbenza, l-esperiment jiġi kkalkulat kif suppost; pereżempju, biex tiddetermina l-konċentrazzjoni jew il-livell ta 'attività ta' enzimi.
Applikazzjoni ta 'spettrofotometru
Wieħed mill-użi komuni ta 'spettrofotometru huwa li tkejjel id-densità taċ-ċellula. Kejl tad-densità taċ-ċelloli jista 'jintuża biex jipproduċi l-kurva logaritmika tat-tkabbir tal-batterja, li minnha jista' jiġi stabbilit l-aħjar ħin għall-integrazzjoni ta 'proteina rikombinanti.
L-ispettrofotometru jista 'jintuża wkoll biex titkejjel ir-rata ta' reazzjoni kimika. F'din l-inkarnazzjoni, l-assorbenza tintuża biex tissorvelja r-reazzjoni enżimatika, li tisparixxi biż-żmien permezz ta 'reazzjoni intermedja ta' 452nm. Ir-rata ta ’dan il-pass enżimatiku tista’ tiġi kkalkulata billi titqabbel id-dejta bl-ekwazzjoni xierqa.
L-introduzzjoni ta 'mikro-spettrofotometru telimina l-ħtieġa ta' detentur tal-kampjun. Dawn l-ispettrofotometri jużaw tensjoni tal-wiċċ biex iżommu l-kampjun.
Il-mikrospettrofotometru huwa l-aħjar għażla biex titkejjel il-massa u l-konċentrazzjoni ta 'kampjuni żgħar u għaljin, bħal bijomolekuli, inklużi proteini u aċidi nuklejiċi.
L-assorbenza ta 'proteini f'280nm tiddependi fuq il-kontenut ta' ktajjen tal-ġenb aromatiċi misjuba fit-triptofan, tirosina u fenilalanina, kif ukoll ir-rabta tad-disulfide bejn iż-żewġ ċisteini.
Il-konċentrazzjoni ta 'proteina tista' tiġi ddeterminata bl-assorbenza tagħha ta '280nm u l-koeffiċjent ta' assorbiment tagħha, li huwa bbażat fuq il-kompożizzjoni ta 'aċidi amminiċi.
Id-DNA u l-RNA għandhom l-assorbenza massima ta '260nm, li minnha jistgħu jiġu determinati l-konċentrazzjonijiet tagħhom. Il-purità tal-aċidi nuklejiċi tista 'wkoll tkun evalwata mill-proporzjon tal-qari tal-assorbiment għal tulijiet ta' mewġa speċifiċi.